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    玩转UNICORN|从入门到精通:Miscellaneous Phase使用全指南

    UNICORN
    2024/09/05
    268



    有没有小伙伴在探索UNICORN时总是会发现一些奇怪的功能不会用?不要紧,玩转UNICORN系列为您揭秘那些你懂的你不懂的UNICORN功能!



    Method Editor窗口方法编程时,Phase Library中有一个叫做Miscellaneous的Phase,可以拖拽至方法流程中的任意位置。Miscellaneous内含New Chromatogram、Set Mark、Delay Volume、Message、Pause Timer几个选项,执行切图、标注、延迟一定体积、信息提示和暂停等功能,来辅助编辑方法以贴合实际的实验过程。


    图1:Miscellaneous包含的命令


      ✦ New Chromatography  ✦  


    New Chromatography命令可以在实验运行过程中对整个实验曲线图谱进行分割并命名。例如在亲和层析实验中,如遇样品体积很大,则在整个实验图谱中Sample Application上样部分占比会非常大,而关键的Elution洗脱部分可能会被挤压到占比很小的区间,而利用New Chromatography命令可以将整个曲线图谱进行分割,例如编辑方法时可以在平衡Equilibration、进样Sample Application、洗脱Elution、清洗Column CIP每一个Phase之前都可以插入一个命名的New ChromatographyMiscellaneous(图2)。


    图2:New Chromatography切割图谱


    方法运行结束后,在Evaluation窗口打开结果,可以看到每一步都有自己独立的曲线图谱窗口,方便单独查看(图3),或者并排一起查看(图4)。


    图3:单独查看每个图谱


    图4:并排查看所有图谱


      ✦ Set Mark  ✦  


    Set Mark用于插入标记注释,并且标注会被写入Run log记录中。例如在实验过程中可以对缓冲液和样品进行Set Mark标注,尤其是在大量筛选洗脱缓冲液时,可以在Elution之前插入Set Mark标注缓冲液配方,并在Scouting中将每个缓冲液入口与标注相互关联(图5)。


    图5:Set Mark对缓冲液进行标注


      ✦ Delay Volume  ✦  


    Delay Volume命令可以将实验延迟一定体积后再执行后续的步骤。例如标签蛋白的柱上酶切纯化实验,利用loop环将蛋白酶inject注入层析中,由于进样阀到层析柱顶端之间有一定的管线体积,例如经过计算为0.15 mL,可以增加一个含Delay VolumeMiscellaneous在进样之后,将残留在进样阀到层析柱之间管线内的蛋白酶完全流入层析柱中,再进行后续的酶切孵育(图6)。


    图6:Delay Volume让管道残留样品流入层析柱


      ✦ Message  ✦  


    Message命令执行时会在软件界面中出现弹窗提示信息、并可以设置弹窗后无期限的暂停实验。

    例如当不便在开始运行实验程序之初就将样品环推入loop中,而是希望在层析柱平衡完毕后暂停实验,手动推入样品至loop然后再执行后续的实验步骤,那么可以在Equilibration和Sample Application之间插入一个含MessageMiscellaneous,其中设置Message信息如Please manual load sample to loop,并勾上Pause after Message(图7)。


    图7:Message设置loop推样提示并暂停实验


    当方法运行至平衡结束时会弹窗提示Message信息要求手动推样(图8)。将样品环手动推入样品后,点击Confirm and Continue就可以确认并继续后续的步骤。


    图8:Message弹窗提示推样并确认和继续


    此外还可以在Text编程窗口中编辑Message命令的其他参数,例如更改声音、设置是否弹窗提示、设置身份认证即输入登录密码和电子签名密码并作文本签注后,方可确认并继续后续的步骤(图9)。


    图9:Text文本编程中可进一步修改Message的参数


      ✦ Pause Timer  ✦  


    Pause Timer为暂停一段时间,然后在执行后续的命令。

    例如标签蛋白的柱上酶切纯化实验。可以在完成进样、洗杂和注入蛋白酶后,静止孵育6 h后,再继续运行后续的洗脱和清洗步骤。


    图10:Pause Timer可用于层析柱孵育


    以上是关于Miscellaneous Phase的所有功能,是否学会了呢?持续关注玩转UNICORN系列,一起了解更多UNICORN功能!


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