治疗类生物制品主要通过动物细胞系生产，这些动物细胞本身可能携带内源性病毒，在生物制品的生产过程中也可能受到外源性病毒的污染。为降低相关风险，ICH Q5A指导原则中提出了三种互补的方法来确保产品的病毒安全性：筛查细胞系和其他原材料、在生产的适当步骤对产品进行检测、评估下游工艺清除潜在病毒污染物的能力。

根据监管机构的要求，生物制品在开展临床研究以及申请上市许可之前，生产商需要对下游纯化工艺去除或灭活病毒的能力进行评估，也就是通常所说的病毒清除验证研究。

为了制定科学合理的生物制品病毒清除验证研究策略，需要始终贯彻“Product Specific（针对产品）”以及“Risk-based（基于风险）”的设计理念。应根据潜在病毒污染物的特点，结合产品自身特性、病毒清除的作用机制进行综合评估，选择适宜的病毒清除工艺步骤以及具有代表性的模型病毒组合。

对于不同类型的生物制品，在病毒清除验证研究设计中需要充分关注产品自身特性。以CHO来源的单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）产品为例，尽管存在较为成熟的下游纯化路径，但仍需根据产品的分子特点及其下游工艺进行定制化的病毒清除验证研究设计。

病毒清除验证研究策略制定的关键步骤包括：

分析产品病毒污染的所有可能途径，包括生产细胞系中的内源性病毒、生产过程使用的相关物料（原材料和辅料）的来源，以及生产期间可能引入的外源性病毒。

例如，若生产中使用了猪源胰蛋白酶，则需要评估病毒引入风险，并且需要考虑在后续的病毒清除验证研究中使用猪源模型病毒。对于鼠源细胞系生产的生物制品，未加工收获液（unprocessed bulk, UPB）的病毒检测结果是病毒清除的关键参数。UPB中逆转录病毒样颗粒（retrovirus-like particles, RVLPs）的数量将作为病毒清除验证研究的起始值。

评价各种技术去除或灭活病毒污染物的有效性。确保所选技术与生产工艺的相容性，且不会对产品质量造成负面影响。鉴于每种技术在病毒清除中都有其特点和局限性，需要进行综合考量，以确保下游纯化工艺整体病毒清除的有效性和稳健性。

在进行病毒清除验证研究前，生产商需要完成生产工艺缩小模型的确认。缩小模型需要能够准确反映实际生产工艺。

病毒清除验证研究方案的设计通常由生产商与第三方实验室的GLP（Good Laboratory Practice）专题负责人共同讨论完成。在制定病毒清除验证研究方案时，应综合考虑产品申报阶段、待评估的工艺步骤、模型病毒的选择、病毒检测方法等因素。

病毒清除验证研究的执行通常涉及生产商、第三方实验室和供应商（如：除病毒滤器供应商）。因此，周密合理的研究计划对于确保病毒清除验证研究高效地进行至关重要。根据相关指导原则的要求，在病毒清除验证研究过程中，应使用“最差工艺条件”。

随着新分子类型和新技术的不断涌现，病毒清除验证研究也迎来新的挑战。

与抗体类产品相比，细胞和基因治疗（cell and gene therapy, CGT）产品的类型更为多样，工艺路径更为复杂多元。在抗体类产品下游纯化工艺中，包含了专门用于病毒清除的工艺步骤，如低pH孵育和除病毒过滤等。然而，大多数CGT产品在纯化工艺中缺乏此类专用步骤。因此，对于CGT产品而言，需要格外关注原材料的筛查以及在生产的适当步骤对产品进行检测。与传统批次生产相比，连续生产工艺在提高生产效率以及降低成本等方面具备一系列优势，获得产业界青睐。但连续生产对病毒清除验证研究提出了诸多挑战。

首先，如何选取合适的工艺中间品，建立有代表性的缩小工艺模型？

其次，由于连续生产下游工艺步骤的处理时间通常较长（例如连续除病毒过滤可能延续几天甚至更长的时间），加之连续生产中会使用一些新型专用设备（如多柱层析系统），如何在第三方实验室顺利地执行这些病毒清除验证项目也成为一个挑战？

要解决上述问题，需要生产企业、供应商以及第三方实验室开展更多的跨界合作。

本篇文章介绍了生物制品病毒清除验证研究的策略制定。那么，在病毒清除验证项目执行过程中，应考虑哪些关键因素？在下篇文章中，我们将进一步为读者分享药明生物的洞见与经验，敬请关注！