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    细胞CRISPR基因敲除2丨敲除载体怎么选？单克隆？分选与鉴定？

    细胞CRISPR
    16小时前
    16


    细胞CRISPR基因敲除



    上期讲到在做CRISPR基因敲除时，如何选用高效gRNA；以及对于编码基因和非编码基因的基因敲除应该怎么做。本期就来讲解一下，敲除载体怎么选？什么是单克隆？如何分选与鉴定？



    1


    敲除载体怎么选？


    细胞实验常用载体包括：质粒，慢病毒和腺病毒，在进行CRISPR基因敲除时，载体的选择会考虑两个方面：一是转染效率，二是是否有稳转cas9或gRNA的需求。

    具体详情，还请听视频讲解！




    2


    单克隆？分选与鉴定？


    目的细胞转染cas9和gRNA载体，表达并发挥切割作用后，被转染的细胞中存在4种情况，筛选得到转染阳性的细胞，即为基因敲除混合克隆（cell pool）；在cell pool基础上，进行单细胞分选培养单克隆，经鉴定敲除成功的即为敲除单克隆。

    更多详情，请观看视频讲解！



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